elasa兩步法測hiv會不會出現鉤狀效應

抽血檢測，一般用三代酶聯合免疫法 酶聯免疫法，簡稱ELISA。 它的中心就是讓抗體與酶複合物結合，然後通過顯色來檢測。 步驟：ELISA用血清來檢測，首先血液要經過至少半個小時的凝集，然後取血清（這是有些網友不理解爲什麼醫院抽完了血對血置之不理的原因，其實是誤會）。

1、將酶複合物用稀釋液稀釋後，加血清及陰性、陽性對照，還有就是質控品（這是嚴格的要求，它的範圍必須在質控範圍內）。

2、經過一個小時的孵育，然後洗板，加底物，半個小時避光反應後加終止液即完成反應部分，然後就是讀數。

3、由數值來判斷結果的陰性或陽性。

4、嚴格的講，如果第一次檢測爲陽性的話，無論是哪個實驗室，必須按照CDC的HIV操作規程來進行第二次檢測，第二次的方法必須與第一次的不同，如還是陽性，將送確認實驗室確認。

5、有的醫院很不負責，將初篩陽性的報告發出後就不管了，這是不對的。

6、必須經過確認實驗室確認後纔可出陽性診斷。

8、PS，第一次檢測爲陽性的話，一定要去確認實驗室再做一次，勇敢的去面對，也許結果就不一樣了。

9、 基本原理是：①使抗原或抗體結合到某種固相載體表面，並保持其免疫活性。

10、②使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體，這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。

11、在測定時，把受檢標本（測定其中的抗體或抗原）和酶標抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應。

12、用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體複合物與其他物質分開，最後結合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質的量成一定的比例。

13、加入酶反應的底物後，底物被酶催化變爲有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據顏色反應的深淺刊物定性或定量分析。

14、由於酶的催化頻率很高，故可極大地地放大反應效果，從而使測定方法達到很高的敏感度。

15、 ELISA可用於測定抗原，也可用於測定抗體。

16、在這種測定方法中有3種必要的試劑：①固相的抗原或抗體，②酶標記的抗原或抗體，③酶作用的底物。

17、根據試劑的來源和標本的性狀以及檢測的具備條件，可設計出各種不同類型的檢測方法。

18、 具體方法有： 雙抗體夾心法 雙抗體夾心法是檢測抗原最常用的方法，操作步驟如下： （1）將特異性抗體與固相載體連接，形成固相抗體：洗滌除去未結合的抗體及雜質。

19、 （2）加受檢標本：使之與固相抗體接觸反應一段時間，讓標本中的抗原與固相載體上的抗體結合，形成固相抗原複合物。

20、洗滌除去其他未結合的物質。

21、 （3）加酶標抗體：使固相免疫複合物上的抗原與酶標抗體結合。

22、徹底洗滌未結合的酶標抗體。

23、此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢物質的量正相關。

24、 （4）加底物：夾心式複合物中的酶催化底物成爲有色產物。

25、根據顏色反應的程度進行該抗原的定性或定量。

26、 根據同樣原理，將大分子抗原分別製備固相抗原和酶標抗原結合物，即可用雙抗原夾心法測定標本中的抗體。

27、 雙位點一步法 在雙抗體夾心法測定抗原時，如應用針對抗原分子上兩個不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作爲固相抗體和酶標抗體，則在測定時可使標本的加入和酶標抗體的加入兩步並作一步（圖15-5）。

28、這種雙位點一步不但簡化了操作，縮短了反應時間，如應用高親和力的單克隆抗體，測定的敏感性和特異性也顯著提高。

29、單克隆抗體的應用使測定抗原的ELISA提高到新水平。

30、 在一步法測定中，應注意鉤狀效應（hookeffect），類同於沉澱反應中抗原過剩的後帶現象。

31、當標本中待測抗原濃度相當高時，過量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結合，而不再形成夾心複合物，所得結果將低於實際含量。

32、鉤狀效應嚴重時甚至可出現假陰性結果。

33、 間接法測抗體 間接法是檢測抗體最常用的方法，其原理爲利用酶標記的抗抗體以檢測已與固相結合的受檢抗體，故稱爲間接法。

34、操作步驟如下： （1）將特異性抗原與固相載體連接，形成固相抗原：洗滌除去未結合的抗原及雜質。

35、 （2）加稀釋的受檢血清：其中的特異抗體與抗原結合，形成固相抗原抗體複合物。

36、經洗滌後，固相載體上只留下特異性抗體。

37、其他免疫球蛋白及血清中的雜質由於不能與固相抗原結合，在洗滌過程中被洗去。

38、 （3）加酶標抗抗體：與固相複合物中的抗體結合，從而使該抗體間接地標記上酶。

39、洗滌後，固相載體上的酶量就代表特異性抗體的量。

40、例如欲測人對某種疾病的抗體，可用酶標羊抗人IgG抗體。

41、 （4）加底物顯色：顏色深度代表標本中受檢抗體的量。