PCR技術的原理是什麼

PCR技術的原理是什麼的答案是：PCR技術的基本原理類似於DNA的天然複製過程，其特異性依賴於與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物PCR產物的生成量是以指數方式增加的，能將皮克(pg=10-12）量級的起始待測模板擴增到微克（μg=-6）水平能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位）；在細菌學中最小檢出率爲3個細菌。

溫度與時間的設置

基於PCR原理三步驟而設置變性-退火-延伸三個溫度點。在標準反應中採用三溫度點法，雙鏈DNA在90～95℃變性，再迅速冷卻至40 ～60℃，引物退火併結合到靶序列上，然後快速升溫至70～75℃，在Taq DNA 聚合酶的作用下，使引物鏈沿模板延伸。對於較短靶基因(長度爲100～300bp時)可採用二溫度點法， 除變性溫度外、退火與延伸溫度可合二爲一，一般採用94℃變性，65℃左右退火與延伸(此溫度Taq DNA酶仍有較高的催化活性)。

PCR反應特點

特異性強 PCR反應的特異性決定因素爲：

①引物與模板DNA特異正確的結合；

②鹼基配對原則；

③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性；

④靶基因的特異性與保守性。

操作步驟

(1)變性：雙鏈DNA在94℃條件下，通過熱變性使模板的雙鏈DNA氫鍵斷裂變成單鏈。

(2)復性：當變性溫度突然降至引物Tm值(通常爲35～65℃)以下時，會使引物與模板DNA互補序列雜交。由於引物一般由10～25個鹼基序列，模板DNA結構遠比引物分子複雜，且反應體系中引物分子的濃度又遠大於模板DNA，故在退火溫度時，引物與模板DNA容易結合形成互補鏈。

(3)延伸：在DNA聚合酶的作用下，以DNA爲模板和以4種脫氧核糖核苷酸爲原料，在Mg2+存在的條件下。DNA聚合酶依賴於其5'→3'的聚合酶活力，以引物結合於DNA模板鏈爲起始點。使引物的序列得以延伸，合成模板DNA的互補鏈。